ちょっと、そこ！のサプライヤーとして生化学半自動分析装置, これらの気の利いた機械の検量線を確立する方法についてよく質問されます。このブログ投稿で詳しく説明するので、幸運です。
まず、検量線とは何か、そしてなぜ検量線がそれほど重要なのかについて話しましょう。検量線は基本的に、物質の濃度と分析装置が測定するシグナル (吸光度や蛍光など) との関係を示すグラフです。未知のサンプルが発する信号に基づいて、そのサンプルの濃度を把握するのに役立ちます。生化学の世界では、酵素、代謝産物、その他の生体分子を検査する場合でも、正確な測定が非常に重要です。したがって、その検量線を正しく取得することは非常に重要です。
ステップ 1: 適切な標準を選択する
検量線を確立する最初のステップは、適切な標準を選択することです。標準とは、測定しようとしている物質の濃度が既知である溶液です。サンプルの予想される範囲をカバーするには、さまざまな濃度のさまざまな標準が必要になります。たとえば、血液サンプル中のグルコース レベルを測定する場合、グルコース濃度が 0 mg/dL、50 mg/dL、100 mg/dL、200 mg/dL、および 400 mg/dL の標準を選択できます。
標準が高品質であり、認識された参照物質に追跡可能であることを確認してください。これにより、校正曲線の精度と信頼性が保証されます。通常、既製の標準品は信頼できるサプライヤーから購入できますが、適切な機器と専門知識があれば社内で作成することもできます。
ステップ 2: 標準の準備
基準を取得したら、分析のために基準を準備します。これには通常、標準物質がまだ希望のレベルになっていない場合、適切な濃度に希釈することが含まれます。また、標準液がよく混合されており、汚染物質が含まれていないことを確認する必要があります。
標準を作成するときは、製造元の指示に注意深く従うことが重要です。相互汚染を避けるために、清潔なガラス器具とピペットを使用してください。また、各標準物質にその濃度と調製日を明確に示すラベルを付けることを忘れないでください。
ステップ 3: アナライザーで標準を実行する
今度は、標準を実行するときです。半自動生化学分析装置。分析装置の操作マニュアルに従って、波長、反応時間、サンプル量などの適切なアッセイパラメータを設定します。
ブランク (通常は分析対象物を含まない溶液) から始めて、濃度の昇順で標準を分析装置にロードします。アナライザーを実行し、各標準のシグナル (吸光度など) を記録します。再現性を確保するために、各標準を少なくとも 2 回実行してください。
ステップ 4: データをプロットする
すべての規格のデータを取得したら、それをグラフにプロットします。グラフの x 軸は標準物質の濃度を表し、y 軸は分析装置によって測定されたシグナルを表します。 Microsoft Excel や Google Sheets などのスプレッドシート プログラムを使用してグラフを作成できます。
グラフ上に各データ ポイントをプロットし、それらのポイントを通る最適な線を描きます。最適な線は、濃度とシグナルの関係を可能な限り正確に表す必要があります。最小二乗法など、最適な直線を計算するにはさまざまな方法があります。ほとんどのスプレッドシート プログラムは、この計算を自動的に実行できます。
ステップ 5: 検量線の評価
データをプロットし、最適な線を引いた後、検量線を評価します。曲線の品質を決定するために確認する必要がある重要なパラメータがいくつかあります。
- R二乗値: これは、最適な直線がデータ ポイントにどの程度適合するかを示す尺度です。 R 二乗値 1.0 は完全な適合を示し、0.0 に近い値は適合が不十分であることを示します。一般に、信頼性の高い検量線を得るには、少なくとも 0.99 の R 二乗値が必要です。
- 傾きと切片: 線の傾きはアッセイの感度を表し、切片はバックグラウンドシグナルを表します。傾きがアッセイの予想範囲内にあり、切片がゼロに近いことを確認してください。
- 残差: 残差は、実際のデータ点と最良適合線によって予測された値との差です。残差を別のグラフにプロットして、パターンがあるかどうかを確認します。残差にパターンがある場合は、濃度とシグナルの関係が線形ではないこと、またはデータに他の問題があることを示している可能性があります。
検量線が品質基準を満たしていない場合は、アッセイのトラブルシューティングを行うか、新しい標準を使用してプロセスを繰り返す必要がある場合があります。
ステップ 6: 検量線を使用してサンプルを分析する
検量線の品質に満足したら、それを使用して未知のサンプルを分析できます。標準と同じアッセイパラメーターを使用して、サンプルを分析装置で実行します。各サンプルの信号を記録し、検量線を使用してサンプル中の分析物の濃度を計算します。
濃度を計算するには、分析装置によって測定された信号に最もよく適合する線上の対応する点を見つけるだけです。これを手動で行うには、グラフから値を読み取るか、スプレッドシート プログラムを使用して直線の方程式に基づいて濃度を補間します。
ステップ 7: 検量線の維持と検証
検量線の作成は 1 回限りではありません。長期間にわたって曲線の精度と信頼性を確保するには、曲線を定期的に保守および検証する必要があります。
- 定期的な校正チェック: 既知の濃度の品質管理サンプルのセットを一定の間隔 (毎日または毎週) で実行して、検量線のパフォーマンスをチェックします。品質管理サンプルの結果が許容範囲外の場合は、分析装置の再校正が必要になる場合があります。
- 機器のメンテナンス: メーカーの指示に従って、アナライザーを清潔に保ち、よくメンテナンスしてください。一貫した性能を確保するために、摩耗した部品や試薬を定期的にチェックして交換してください。
- メソッドの検証: アッセイ法を定期的に検証して、精度、精度、直線性などの必要な性能基準を満たしていることを確認します。これには、習熟度テストのサンプルを実行したり、その結果を参照方法を使用して得られた結果と比較したりすることが含まれる場合があります。
結論
生化学半自動分析装置の検量線を確立することは、正確で信頼性の高い測定を保証するための重要なステップです。このブログ投稿で概説されている手順に従うことで、アナライザーを最大限に活用するのに役立つ高品質の検量線を作成できます。
もしあなたが市場に参入しているのであれば、生化学半自動分析装置または、キャリブレーションやアッセイ開発に関するサポートが必要な場合は、お気軽にお問い合わせください。私たちはあらゆる面であなたをサポートします。研究室、臨床検査室、医療提供者のいずれであっても、当社はお客様のニーズに適したソリューションを提供します。今すぐお問い合わせいただき、お客様の要件と、お客様の目標達成をどのように支援できるかについて話し合ってください。
参考文献
- 臨床検査標準協会 (CLSI)。 （2018年）。定量測定手順の分析パフォーマンスの評価;承認されたガイドライン - 第 4 版。 CLSI 文書 EP05-A4。
- メーカーの取扱説明書半自動生化学分析装置。